體外培養(yǎng)的細(xì)胞與體內(nèi)細(xì)胞一樣，需要在合適的溫度和pH下生存。培養(yǎng)工作既可在培養(yǎng)箱(culture incubator)中進行，也可在控溫溫室中進行，若一或兩臺培養(yǎng)箱就能滿足需要，那么用培養(yǎng)箱是相對經(jīng)濟且節(jié)省空間的最好途徑。常用的培養(yǎng)箱包括電熱恒溫培養(yǎng)箱、濕式CO2培養(yǎng)箱和厭氧培養(yǎng)箱。

1.電熱恒溫培養(yǎng)箱

培養(yǎng)箱要具有較高的溫度靈敏度。一般選購隔水式或晶體管式控溫培養(yǎng)箱，該培養(yǎng)箱靈敏度高，溫度控制較恒定。根據(jù)工作原理可將電熱恒溫培養(yǎng)箱分為隔水式和氣套式兩種。電熱恒溫培養(yǎng)箱價格較便宜，但只適于細(xì)菌培養(yǎng)和封閉式細(xì)胞培養(yǎng)，并常用于有關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)器材和試劑的預(yù)溫和恒定。

2.CO2培養(yǎng)箱

CO2培養(yǎng)箱是細(xì)胞培養(yǎng)水平提高和培養(yǎng)器皿多樣化后提出的高要求產(chǎn)物，它除有恒溫培養(yǎng)箱的性能外，還能夠恒定供應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)時所需要的CO2（一般濃度5%），維持培養(yǎng)液酸堿度穩(wěn)定，適于開放或半開放培養(yǎng)。此外，還具有殺菌、安全等其他完善的輔助功能，故在動物細(xì)胞培養(yǎng)、病毒增殖、細(xì)菌培養(yǎng)中被廣泛采用。CO2培養(yǎng)箱種類繁多，根據(jù)工作原理，可分為氣套式CO2培養(yǎng)箱、水套式CO2培養(yǎng)箱、紅外CO2培養(yǎng)箱、高溫滅菌培養(yǎng)箱、光照低溫培養(yǎng)箱、恒溫恒濕培養(yǎng)箱等。CO2培養(yǎng)箱價格較貴，但使用方便，CO2分壓和溫度容易控制。CO2濃度通過CO2檢測裝置控制，空氣通過自然對流在培養(yǎng)箱內(nèi)循環(huán)，以保持CO2水平和溫度均一。當(dāng)使用不透氣瓶蓋培養(yǎng)瓶時，可將瓶蓋稍微旋松，使之與外界保持通氣狀態(tài)，因此培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須保持清潔。為避免污染，要定期用紫外線燈照射或者75%乙醇擦拭對培養(yǎng)箱進行消毒。另外，要維持箱內(nèi)溫度、濕度恒定，可用無菌蒸餾水定期注入外箱內(nèi)，或?qū)o菌潮濕的紗布置于托盤內(nèi)，然后放入CO2培養(yǎng)箱，使箱內(nèi)始終保持穩(wěn)定的相對濕度，防止培養(yǎng)液蒸發(fā)而影響細(xì)胞的生長。

培養(yǎng)箱大小的選擇由使用人數(shù)和培養(yǎng)物類型決定。當(dāng)多人同時進行細(xì)胞培養(yǎng)時，可以選用一個中型培養(yǎng)箱（可同時放置1 000個細(xì)胞培養(yǎng)板，或存放完成10次實驗所需要的培養(yǎng)物）。若人員較少，則一臺小型培養(yǎng)箱就可滿足需要。CO2培養(yǎng)箱，特別是有加濕器的CO2培養(yǎng)箱必須經(jīng)常清洗。所以，內(nèi)部應(yīng)易于拆卸，不留難以清潔的縫隙和死角。培養(yǎng)物從培養(yǎng)箱取到潔凈臺或其他無菌臺使用時，應(yīng)用酒精擦拭培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿或裝它們的箱子，然后再進行下一步操作。